Antígenos recombinantes de Mycoplasma hyopneumoniae para a formulação de vacinas contra a pneumonia enzoótica suína

Mycoplasma hyopneumoniae é o agente etiológico da pneumonia enzoótica suína (PES), que é uma doença respiratória crônica responsável por grandes perdas econômicas na suinocultura. As vacinas usada s contra PES são constituídas por células bacterianas inativadas, se ndo chamadas de bacterinas. Estas vacinas apresentam custo relativamente alto d e produção, devido às dificuldades de cultivo de M. hyopneumoniae , além de oferecerem apenas proteção parcial aos animais vacinados. A partir do sequenciamento do genoma de linhagens de M. hyopneumoniae , o trabalho de identificação de genes codificadores de proteínas potencialmente ant igênicas (que são capazes de induzir resposta imune) foi acelerado, permitind o a seleção de diversos antígenos como candidatos para utilização em vacina contra a PES. A produção e caracterização imunológica de antígenos recombinantes (proteínas de M. hyopneumoniae expressas a partir da clonagem dos genes correspondentes em outra bactéria) é uma etapa do p rocesso de desenvolvimento de vacinas alternativas, potencialm ente mais eficientes e a um custo menor que o de bacterinas. Neste trabalho, estão sendo avaliadas três proteínas antigênicas de M. hyopneumoniae , que serão chamadas de MH1, MH2, MH3, uma vez que suas identidades são pro tegidas por patente. Para isso, a sequência de DNA codificadora (CDS) co mpleta da proteína MH1 e as CDSs parciais das proteínas MH2, MH3 foram clo nadas em um vetor de expressão plasmidial e as proteínas recombinantes c orrespondentes foram expressas na bactéria Escherichia coli . Esta metodologia foi empregada devido à facilidade de cultivo de E. coli em relação a M. hyopneumoniae , reduzindo o tempo e o custo de produção dos antígenos expressad os. Os antígenos recombinantes foram expressos como proteínas de fus ão com uma proteína marcadora (GST) e purificados de extratos proteicos totais da bactéria por cromatografia de afinidade. Os antígenos recombinan tes obtidos tiveram a porção correspondente à GST removida por clivagem p roteolítica. Devido à contaminação destes antígenos com lipopolissacaríde os (LPS) antigênicos oriundos da parede celular da bactéria, foi necessá ria ainda a aplicação de uma etapa adicional de purificação, para extração d e LPS, antes da realização de ensaios imunológicos. Devido às características diferenciais de hidropaticidade dos antígenos, diferentes protocolo s para a remoção de LPS tiveram que ser padronizados e aplicados a cada uma delas. Os antígenos recombinantes purificados e livres de LPS foram ent ão utilizados em ensaios de imunização de camundongos, para avaliação de imu nogenicidade. Os resultados obtidos demonstraram que os antígenos re combinantes MH1, MH2 e MH3 são imunogênicos, tendo sido demonstrada a ca pacidade dos três de induzir uma resposta imune humoral (produção de imu noglobulinas específicas). Além disso, a resposta celular induzi da pelos antígenos recombinantes está sendo avaliada com base na produ ção de citocinas por esplenócitos (células do baço) dos animais imunizad os. Após a demonstração inicial da imunogenicidade dos antígenos MH1, MH2 e MH3, as respectivas CDS também foram clonadas em vetor plasmidial de ex pressão em células de mamíferos. Os clones (construções de DNA) resultant es serão testados através de ensaios de imunização de camundongos com DNA, pa ra avaliação do potencial destas construções para utilização no des envolvimento de vacinas de DNA. Após a conclusão da avaliação imunológica em c amundongos, os antígenos recombinantes e as construções de DNA mai s promissoras serão utilizadas, individualmente ou em diferentes combin ações, em ensaios preliminares de imunização em suínos.