Otimização do cultivo de células-tronco mesenquimais para uso clínico

Introdução: Estudos com células-tronco mesenquimais (CTM) demonstram seus benefícios em diversas situações na área de hematologia, principalmente para doença do enxerto contra o hospedeiro. As CTMs são normalmente expandidas em meio suplementado com Soro Fetal Bovino (SFB), contudo a OMS publicou um memorando alertando sobre o risco de xenorreação. Por esse motivo tem se explorado a utilização de um suplemento de origem humana, o lisado de plaquetas (LP). O número ideal de células necessárias para a terapia ainda não está bem definido, mas há a indicação de se usar 2x106 células/Kg. Há a necessidade de padronizar a melhor maneira de cultivo dessas células, em um tempo curto de cultivo, mas com um alto número de células. Outro fator importante é a opção de usar células do mesmo doador de células-tronco hematopoéticas (CTH), para diminuir a chance de transmissão de vírus, visto que o receptor receberia células apenas de um doador, com isso usamos células retiradas do filtro e bolsa utilizados no transplante de CTH. Objetivos: determinar a superioridade ou a não inferioridade do lisado de plaquetas humanas como fator de expansão de CTM, determinar a concentração ideal de plaqueamento e dias entre cada passagem. Verificar se as células retiradas do filtro e bolsa do transplante de células tronco hematopoéticas podem ser usadas em grau clínico. Materiais e Métodos: As células nucleadas foram retiradas dos filtros e bolsas utilizadas no transplante de CTH e após a primeira passagem foram cultivadas em diferentes concentrações (2000/cm2 , 3000/cm2 , 4000/cm2 , 5000/cm2 , 6000/cm2 e 7000/cm2 ) com 10% de SFB e 10% de LP, até a cultura atingir 80% de confluência. Também foram plaqueadas células, na mesma concentração, com 10% de SFB e 10% de LP e após sete dias foram tripsinizadas e contadas, para analisar o quanto elas cresceram nesse período de tempo. Realizamos cultivos para ver a expansão de CTM obtidas do filtro e bolsa do transplante de CTH é viável para uso clínico. Resultados: A proliferação das CTM em presença de LP e de SFB foi em média de 11,88 e 2,5 vezes, respectivamente, em um período de 7 dias (p=0,05). A maior concentração de plaqueamento, usando LP, levou menos tempo (6 dias) para atingir a confluência quando comparado com as três menores (7,55 a 8,55 dias) (p=0.005). No crescimento de células obtidas do filtro e bolsa do TCH obtivemos de 10x109 a 10 x 1011células. Conclusão: Este estudo sugere que o LP é um suplemento de melhor escolha na produção de CTM e que é possível obter um número de células suficientes para o tratamento de um paciente com 70kg a partir do resíduo de células obtidos dos filtros e bolsas utilizadas no TCH.