Encapsulação de peptídeos antimicrobianos pelas bactérias lácticas isoladas de leite de búfala, pelo Método da Hidratação do Filme Lipídico

Este trabalho teve como objetivo inicial selecionar bactérias ácido-lácticas (BAL) com atividade antibacteriana e antifúngica, isoladas a partir de leite cru de búfala, buscando a produção de peptídeos antimicrobianos (bacteriocinas) a partir destas culturas. A ideia inicial era a partir da identificação da produção de peptídeos antimicrobianos, encapsular estes compostos buscando avaliar a eficiência do processo de encapsulação e a manutenção da atividade antimicrobiana. Outro ponto considerado nesta pesquisa é que a encapsulação de bactérias tem um papel importante no uso de probióticos, pela indústria de laticínios, pois promove uma maior proteção a essas culturas frente a condições ambientais adversas no processamento de alimentos, como elevadas temperaturas, presença de sal, bem como proteção ao uso de aditivos/conservantes. Entretanto, após a identificação de linhagens com propriedades antimicrobianas e testes feitos para avaliar a natureza desta atividade, observou-se que não havia atividade antimicrobiana do tipo bacteriocina. Considerando que a proposta inicial do trabalho era encapsular os peptídeos antimicrobianos, a partir de então foi realizada outra abordagem no projeto: objetivou-se aplicar a tecnologia da microencapsulação nas próprias culturas de BAL que demonstraram um potencial antimicrobiano maior frente às bactérias e aos fungos patogênicos testados. Foram selecionados dois isolados para esse propósito, as culturas LB7.9 e LB8.5. A metodologia utilizada foi a microencapsulação a partir do uso do alginato de sódio. Para a encapsulação, as culturas de BAL foram inoculadas em caldo MRS e, após centrifugação, as células foram lavadas com água peptonada. A suspensão de células obtida foi misturada a uma solução de alginato de sódio 2%. Essa mistura foi transferida para uma seringa estéril equipada com agulha de 0,45mm e o líquido foi ejetado lentamente para dentro de um frasco contendo CaCl2 0,05M suplementado com Tween 80, onde formaram-se as cápsulas. Essas cápsulas foram lavadas com água peptonada e filtradas através de um papel filtro. Por fim foram armazenados em água peptonada a 4°C. Para avaliação da viabilidade das culturas após a encapsulação, foi feito o método de contagem em placa em superfície, utilizando o meio de cultura agar MRS. Foi realizada uma contagem inicial das culturas antes da encapsulação. Após a encapsulação, foram feitas duas contagens: na primeira, utilizouse o sobrenadante resultante no final do processo de encapsulação; na segunda, foi retirado 1g das cápsulas, acrescentado solução tampão fosfato e a amostra foi submetida ao processo de sonicação. Até o momento puderam ser feitas duas encapsulações. Antes de encapsular a cultura LB7.9, tínhamos uma média de 2,74 x 108 ufc/ml e após a encapsulação observamos que após o processo de sonicação o que pode ser contado em placas, após 48h, foi uma média de 2,87 x 105 ufc/ml. Quanto à cultura LB8.5, antes de encapsular tínhamos aproximadamente 4,15 x 106 ufc/ml e após a encapsulação observamos que após a sonicação o que pode ser contado em placas, após 48h, foi de 7,5 x 103 ufc/ml. A metodologia de encapsulação ainda está em fase de ajustes, mas de acordo com os resultados obtidos foi averiguado que as culturas lácticas puderam ser encapsuladas, bem como permaneceram viáveis após a encapsulação. Assim, após os possíveis ajustes no protocolo, as propriedades antimicrobianas e probióticas das culturas serão avaliadas, pensando em uma posterior aplicação em experimentos pilotos na produção de alimentos.