Desenvolvimento de um método específico, simples e rápido para a detecção de um fungo micotoxigênico
Micotoxinas são substâncias químicas que resultam da atividade metabólica de alguns fungos, que podem se desenvolver em partes das plantas como os grãos, inclusive durante a armazenagem, e nos alimentos processados a partir desses. Caso sejam ingeridas ou inaladas em determinados níveis, as micotoxinas podem ser tóxicas aos seres humanos e aos animais, causando sintomas como vômitos, hemorragias, recusa de alimento, interferência no sistema imunológico, redução de peso, redução de produção (ovos e leite), infertilidade e em doses muito elevadas a morte. Não existe um padrão internacional de legislação para regular os níveis aceitáveis de micotoxinas. No Brasil a regulamentação ocorre apenas para algumas micotoxinas. O presente trabalho consiste na elaboração de um método eficiente e rápido para a detecção de micotoxinas produzidas por Fusarium verticillioides em contato com o grão de milho. Para a detecção dos genes codificantes de enzimas-chave na produção das fumonisinas, grupo de micotoxinas produzidas por fungos do gênero Fusarium, foi usada técnica de PCR em tempo real, que permite a amplificação e quantificação de sequências de DNA. O crescimento do fungo puro foi realizado em meio de cultura BDA-ágar. Primeiramente foram feitas análises de esporos puros do fungo, para confirmar a eficiência do método, com uma série de diluições decimais a partir de uma suspensão de esporos com concentração de 106 esporos por mililitro, a quantificação do número de esporos foi feita através da câmara de Neubauer. Após a detecção do fungo em seu estado puro, ele foi inoculado, posto em contato com grãos de milho. Para efetuar a análise do fungo no grão, os esporos presentes foram removidos e misturados em 1 mililitro de água destilada autoclavada, para então se efetuar a extração do DNA e subsequente amplificação por PCR em tempo real. Na amostra com esporos puros em que foi realizada uma série de diluições com quantidades conhecidas de esporos, o PCR em tempo real amplificou a sequência de DNA a partir da quantidade de 10² esporos por mililitro, apresentando uma correlação entre concentração de esporos e o ciclo limiar (Ct). As amostras analisadas com esporos do fungo crescido no grão de milho apresentaram valores de Ct equivalentes aos da amostra quantificada, evidenciando quantidades entre 106 e 10² esporos por mililitro. Com as análises obtidas a detecção de micotoxinas produzidas por Fusarium verticillioides no grão de milho através da técnica de PCR em tempo real se mostrou possível. No vídeo documentário será apresentado um breve histórico sobre o fungo Fusarium verticillioides e as consequências causadas pela ingestão de micotoxinas. O procedimento realizado para a detecção de micotoxinas através do PCR em tempo real será demonstrado, incluindo o passo a passo, desde a captação de esporos até a execução do PCR em tempo real.
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